Référence : Molecules 2012. — PMC6268060 · DOI 10.3390/molecules17022058 Type : article de recherche phytochimique (analyse GC/GC-MS de l’huile essentielle et de l’espace de tête) · Plante : Petite centaurée · Propriété → Digestion Accès : ⭐ libre (open-access CC-BY 3.0) → texte intégral traduit Fidélité : traduction intégrale et fidèle du texte des auteurs. Appels [n] omis ; figures/tableaux « [ ] ».
La chromatographie en phase gazeuse (GC) et la spectrométrie de masse (MS) ont été utilisées pour l’analyse de l’huile essentielle de Centaurium erythraea Rafn de Croatie (obtenue par hydrodistillation) et de son espace de tête (headspace) (en appliquant la microextraction en phase solide de l’espace de tête). L’espace de tête contenait de nombreux hydrocarbures monoterpéniques (les principaux étaient le terpinène-4-ol, la menthone, le p-cymène, le γ-terpinène et le limonène). Des monoterpènes oxygénés étaient présents dans l’espace de tête et dans l’huile, tandis que le 1,8-cinéole, l’acétate de bornyle et la verbénone n’étaient présents que dans l’espace de tête. De hauts pourcentages de toluène et de naphtalène ont été trouvés dans l’espace de tête, suivis de l’hémimellitène. Beaucoup de similitudes ont été observées avec l’huile serbe de C. erythraea [néophytadiène (1,4 %), thymol (2,6 %), carvacrol (6,1 %) et acide hexadécanoïque (5,7 %)], mais des caractéristiques différentes ont aussi été notées, telles que la présence de menthol, de menthone et de phytone. Le fractionnement de l’huile a permis l’identification d’autres composés mineurs non trouvés dans l’huile totale, tels que des norisoprénoïdes, des alk-1-ènes ou la chromolaénine. L’huile essentielle a montré un potentiel antimicrobien sur Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Staphylococcus aureus et Bacillus cereus. En revanche, aucune activité antibactérienne de l’huile n’a été observée sur Pseudomonas fluorescens et Lysteria monocytogenes.
La petite centaurée, Centaurium erythraea Rafn (Gentianaceae), est une plante médicinale traditionnelle en Croatie. L’usage de C. erythraea en médecine traditionnelle a été décrit dans la pharmacopée de 23 pays différents. Elle a été utilisée pour le traitement de l’asthme, de l’eczéma, des rhumatismes, des plaies et des ulcères, ainsi que pour réduire les spasmes des muscles lisses gastro-intestinaux et les troubles digestifs (perte d’appétit, inconfort gastrique et indigestion). Des études phytochimiques antérieures sur C. erythraea ont révélé la présence d’une variété de métabolites secondaires végétaux, comprenant le centauroside, la centapiricine, des flavonoïdes, la gentiopicrine, le gentiopicroside, l’isocoumarine, des acides phénoliques et leurs dérivés, la swertiamarine, des terpénoïdes et des xanthones. Beaucoup de ces composés sont connus pour présenter d’importantes activités biologiques (antimicrobienne, antimutagène et antioxydante). Des investigations ont montré que C. erythraea (infusion lyophilisée) est un antioxydant efficace, capable de piéger le radical superoxyde et d’inhiber de manière non compétitive la xanthine oxydase. Des effets anti-inflammatoires et antipyrétiques d’un extrait aqueux de la plante ont également été observés expérimentalement chez le rat. L’activité antibactérienne de l’infusion de C. erythraea a été testée sur plusieurs espèces bactériennes, et Bacillus megaterium a présenté la plus grande sensibilité, tandis qu’Escherichia coli et Staphylococcus aureus n’étaient pas sensibles à l’infusion.
C. erythraea a fait l’objet de plusieurs investigations physicochimiques, mais la composition chimique de son huile essentielle n’a été étudiée que récemment en Serbie, tandis qu’il n’existe aucune donnée sur la composition de son espace de tête. Dans la littérature, il n’y a également eu aucune tentative d’investigation de l’effet antibactérien de l’huile essentielle. Par conséquent, le but de la présente étude était d’étudier la composition phytochimique des composés organiques volatils (COV) de C. erythraea Rafn de Croatie (y compris l’espace de tête), et aussi d’établir le potentiel antimicrobien de son huile essentielle sur des espèces bactériennes Gram-positives et Gram-négatives sélectionnées. Afin d’obtenir une composition chimique plus détaillée des composés volatils, une double approche a été utilisée : la microextraction en phase solide de l’espace de tête (HS-SPME) et l’hydrodistillation (HD). En raison de la composition complexe attendue de l’huile, le fractionnement en fractions non polaires et polaires a été réalisé par chromatographie sur microcolonne de gel de silice. Tous les isolats ont été analysés par chromatographie en phase gazeuse et spectrométrie de masse (GC, GC-MS).
L’hydrodistillation (HD) des parties aériennes de C. erythraea a donné une huile jaune (rendement 0,02 %). Les COV de la plante présents dans l’espace de tête (obtenu par HS-SPME) et l’huile essentielle (obtenue par HD) ont été analysés par GC et GC-MS. L’huile a ensuite été fractionnée par chromatographie sur microcolonne de gel de silice (donnant des fractions polaires et non polaires) afin d’éviter de potentiels chevauchements de pics GC. De plus, l’huile isolée a été testée pour révéler son potentiel antimicrobien contre des cultures Gram-positives et Gram-négatives sélectionnées.
Deux fibres (PDMS/DVB et DVB/CAR/PDMS) ont été sélectionnées pour la HS-SPME après une recherche préliminaire portant sur le nombre total de composés isolés. Les deux fibres ont montré des profils chimiques qualitativement similaires des composés extraits, mais les pourcentages individuels des composés variaient. Un total de 52 COV ont été identifiés et rapportés pour la première fois dans l’espace de tête de C. erythraea.
[ ]
Les hydrocarbures aliphatiques et aromatiques étaient abondants, en particulier le toluène (4,5 % ; 18,0 %) et le naphtalène (8,2 % ; 1,8 %), suivis des o- et m-éthyltoluène (0,8–1,7 %). Les triméthylbenzènes pseudocumène (0,9 % ; 1,0 %) et hémimellitène (1,8 % ; 2,5 %) étaient également présents, mais n’ont pas été trouvés dans la composition de l’huile. Bien que les dérivés du benzène soient habituellement considérés comme des composés d’origine possiblement anthropique, de nouveaux résultats indiquent d’autres voies possibles de leur biogenèse naturelle. En effet, l’émission de toluène par différentes plantes a été observée, bien qu’aucune voie biochimique de production de toluène ne soit connue. Des quantités traces de naphtalène sont produites par les magnolias, et des extraits floraux issus des gynécées de cinq taxons (Magnolia denudata, Magnolia liliiflora, Magnolia tomentosa, Magnolia praecocissima var. praecocissima et var. borealis) contenaient du naphtalène comme composant principal. En outre, le termite souterrain de Formose et certaines souches du champignon Muscodor albus produisent naturellement du naphtalène, tandis que Muscodor vitigenus produit du naphtalène presque exclusivement. Par conséquent, l’origine naturelle des dérivés du benzène trouvés dans l’huile de C. erythraea pourrait être similaire, et ils peuvent être exclus comme polluants puisque la plante a été récoltée dans une zone écologiquement pure. Des hydrocarbures aliphatiques et des composés carbonylés jusqu’à C18 étaient présents comme constituants mineurs (provenant probablement du catabolisme des acides gras), et ceux jusqu’à C6 n’ont été trouvés que dans l’espace de tête de C. erythraea (très vraisemblablement en raison de leur forte volatilité et du délai de solvant appliqué pour l’analyse GC de l’huile).
[ ]
Contrairement à la composition chimique de l’huile, l’espace de tête contenait d’abondants hydrocarbures monoterpéniques, les principaux étant le p-cymène (2,8 % ; 3,5 %), le γ-terpinène (2,2 % ; 2,2 %) et le limonène (1,5 % ; 1,8 %). Plusieurs n’ont été trouvés que dans l’espace de tête, à de faibles pourcentages (α-pinène, sabinène, β-pinène, p-cymène, limonène, γ-terpinène et α-terpinolène). Les monoterpènes oxygénés étaient généralement présents dans l’espace de tête et l’huile essentielle (quoique avec des abondances différentes), et les principaux dans l’espace de tête étaient le terpinène-4-ol (10,3 % ; 6,9 %), la menthone (6,1 % ; 4,3 %), le linalol (2,8 % ; 0,9 %), la β-thujone (2,8 % ; 1,2 %), le camphre (5,1 % ; 2,0 %), l’isomenthone (0,9 % ; 1,6 %), le menthol (2,9 % ; 6,7 %) et l’acétate de menthyle (1,6 % ; 0,9 %). Seuls quelques monoterpènes oxygénés ont été trouvés exclusivement dans l’espace de tête : le 1,8-cinéole, l’acétate de bornyle et la verbénone. Le β-caryophyllène (3,7 % ; 1,6 %), le trans-β-farnesène (2,5 % ; 0,7 %), l’α-copaène (2,0 % ; 0,8 %) et le longifolène (1,0 % ; 1,6 %) ont été identifiés parmi les sesquiterpènes avec des pourcentages plus élevés par rapport à l’huile, mais un grand nombre d’autres sesquiterpènes de l’huile essentielle n’ont pas été trouvés par HS-SPME.
Un total de 89 composés ont été identifiés dans l’huile essentielle de C. erythraea Rafn. Comparé à l’unique rapport antérieur sur cette huile de Serbie, le nombre total de composés identifiés semble modéré, mais il convient de souligner que la composition d’huile précédemment publiée était dominée (ca. 50 %) par des composés à l’état de traces (< 0,05 %). Cette recherche s’est concentrée sur la détermination détaillée des composés non-traces de l’huile, incluant les résultats du fractionnement de l’huile en fractions non polaire et polaire.
L’huile essentielle totale contenait une faible abondance de monoterpènes oxygénés, les principaux étant le menthol (7,0 %), le linalol (3,0 %), le bornéol (1,4 %) et la menthone (2,5 %). Le menthol et la menthone n’ont pas été trouvés dans l’huile serbe (seules des traces d’isomenthol y ont été détectées), de même que la β-thujone (0,8 %). Le bornéol (1,4 %) et le camphre (1,5 %) ont été identifiés dans l’huile croate, tandis que seules des traces avaient été rapportées dans l’huile serbe. Les phénols monoterpéniques thymol (2,6 %) et carvacrol (6,1 %) étaient des caractéristiques intéressantes également rapportées parmi les constituants majeurs de l’huile serbe (thymol 7,9 % et carvacrol 4,2 %). Bien que ces phénols aient été présents dans l’huile, ils n’ont pas été identifiés dans l’espace de tête. Au contraire, leurs précurseurs biosynthétiques γ-terpinène et p-cymène ont été trouvés dans l’espace de tête, mais pas dans l’huile.
Le néophytadiène (10,1 %) était le composé majeur de l’huile serbe, tandis que dans cette recherche il s’élevait à 1,4 %. Le néophytadiène est vraisemblablement un métabolite de la chlorophylle. Les cycles chlorine de la chlorophylle peuvent être construits à partir de plusieurs chaînes latérales différentes, incluant habituellement l’alcool diterpénique à longue chaîne phytol (trouvé dans l’huile à 1,9 %). L’isophytol (0,3 % dans l’huile) est un isomère du phytol, et l’isomérisation de l’isophytol en phytol dans les cires foliaires des plantes est rapportée. L’oxydation de la fraction phytol de la chlorophylle pourrait conduire, entre autres, à la cétone d’acide gras méthylée à longue chaîne hexahydroxyfarnésyl acétone (6,10,14-triméthylpentadécan-2-one, phytone), qui a été trouvée dans l’huile à 4,0 %. Le quatrième composé majeur de l’huile serbe était l’acide hexadécanoïque (4,9 %), tandis que l’huile croate en contenait 5,7 %, suivi de l’acide linoléique (3,9 %) et de l’acide tétradécanoïque (1,5 %). Des hydrocarbures aliphatiques de haut poids moléculaire étaient présents, en particulier le tricosane (6,8 %). Leur abondance était plus élevée par rapport à l’huile serbe. Des sesquiterpènes ont également été trouvés en faibles pourcentages ; les principaux étaient l’oxyde de caryophyllène (0,9 %) et le δ-cadinène (0,8 %). Comme attendu, les composés de haut poids moléculaire de l’huile essentielle n’ont pas été identifiés dans l’espace de tête, en raison de leur faible volatilité.
Le fractionnement sur microcolonne de gel de silice a permis une analyse plus détaillée par la séparation de l’huile en composés non polaires et polaires. Comme attendu d’après la composition de l’huile totale, la fraction des composés non polaires (a) était dominée par des hydrocarbures aliphatiques supérieurs tels que le tricosane (25,7 %), l’hénéicosane (8,7 %), le nonadécane (4,6 %) et d’autres. Cependant, la fraction pentane a révélé la présence d’hydrocarbures aliphatiques de bas poids moléculaire (chevauchés dans l’huile totale), et le nonane (8,6 %) en était le principal. De plus, des alk-1-ènes n’ont été trouvés que dans cette fraction, incluant l’hexadéc-1-ène (1,7 %), l’octadéc-1-ène (2,6 %) et le tétradéc-1-ène (0,5 %) ainsi que l’eicos-3-ène (2,3 %). Selon la longueur de leur chaîne et la position de leurs doubles liaisons, ils dérivent des acides gras correspondants.
[ ]
Il est possible que certains des hydrocarbures trouvés soient des artéfacts de l’hydrodistillation. Les plantes ont été récoltées dans une zone écologiquement pure et la possibilité de contamination est donc exclue. L’existence naturelle d’hydrocarbures dans les plantes est également connue. De nombreux membres supérieurs des n-alcanes, n-alcan-1-ols, n-alcanals, acides n-alcanoïques et esters n-alkyliques ont été identifiés dans les cires cuticulaires.
La variété d’hydrocarbures sesquiterpéniques identifiés dans la fraction non polaire était principalement composée de δ-cadinène (1,9 %), de β-caryophyllène (1,1 %) et de trans-β-farnesène (1,0 %). Leurs pourcentages étaient plus élevés par rapport à l’huile, et plusieurs n’ont été identifiés que dans cette fraction, et non dans l’huile. Le composé monooxygéné plutôt inhabituel chromolaénine (2,1 %), avec une structure cadinane et précédemment rapporté dans les huiles essentielles de Baccharis salicifolia, B. latifolia et B. dracunculifolia, n’a également été détecté que dans la fraction pentane.
La fraction polaire de l’huile (b) contenait une variété de monoterpènes oxygénés (comme attendu, avec des pourcentages plus élevés par rapport à l’huile), et les principaux étaient : le menthol (8,8 %), la menthone (3,3 %), le linalol (3,9 %), le bornéol (1,6 %) et le trans-anéthole (1,0 %). Le thymol (5,8 %) et le carvacrol (13,8 %) figuraient parmi les composés les plus répandus de cette fraction. Les sesquiterpènes oxygénés étaient principalement composés d’α-cadinol (1,6 %), d’oxyde de caryophyllène (1,7 %), d’acorénone B (1,2 %) et de viridiflorol (1,1 %). La phytone (6,6 %) était le composé le plus abondant lié à la chlorophylle. La fraction diéthyléther a contribué à l’identification de norisoprénoïdes [(E)-β-damascénone (2,8 %) et (E)-β-ionone (2,0 %)], un groupe de composés exclusivement présents dans la fraction pentane. L’acide palmitique et l’acide linoléique étaient les principaux acides gras de la fraction.
L’huile essentielle de C. erythraea a montré des potentiels antimicrobiens différents envers les espèces bactériennes testées. En général, les bactéries Gram-négatives (E. coli et S. enteritidis) étaient les espèces les plus sensibles à l’huile, tandis qu’il n’y avait aucun effet sur la croissance de P. fluorescens. L’ampicilline (10 μg), la norfloxacine (10 μg), l’ofloxacine (5 μg) et la tétracycline (30,5 μg) ont été utilisées comme standards de référence positifs pour déterminer la sensibilité des souches bactériennes testées. Bien que les antibiotiques appliqués aient possédé en général la plus forte activité antibactérienne, l’activité de C. erythraea sur E. coli était presque identique aux zones d’inhibition de l’ampicilline. Les antibiotiques sont des molécules à activité sélective envers les cellules des micro-organismes, tandis que les huiles essentielles sont des composés à composants nombreux, différents et souvent variables, qui attaquent différentes parties des structures cellulaires. Il est extrêmement difficile de comparer les zones d’inhibition produites par les antibiotiques et par les composés bioactifs, puisqu’ils diffèrent par leur nature et leur mécanisme d’inhibition. Néanmoins, les antibiotiques sont utilisés comme témoins dans tout test de composé pour garantir des informations sur la sensibilité des souches testées et un contrôle interne. L’activité antimicrobienne plus élevée observée est vraisemblablement liée aux constituants principaux de l’huile, bien qu’une partie de l’activité puisse résulter de la présence de constituants mineurs de l’huile. En général, les huiles essentielles les plus actives (principalement composées de carvacrol, thymol, citral, eugénol et leurs précurseurs) contre les souches d’E. coli sont : l’huile d’origan (Origanum vulgare), de thym (Thymus vulgaris), de bay (Pimenta racemosa) et de girofle (Eugenia caryophyllata). L’huile de C. erythraea contenait le thymol et le carvacrol comme constituants majeurs et a présenté une activité notable contre E. coli. Le menthol est abondant dans l’huile de C. erythraea, et les CMI ont démontré que le menthol est plus toxique contre E. coli que le thymol. Le mécanisme d’activité antimicrobienne du thymol, du carvacrol et du menthol est bien connu (altération de la perméabilité membranaire). De plus, la forte activité antimicrobienne de l’huile de basilic (Ocimum basilicum) (dont les constituants majeurs étaient le linalol et le 1,8-cinéole) contre S. enteritidis est connue, et le linalol était présent dans l’huile de C. erythraea qui a présenté une activité contre S. enteritidis. Cependant, il existe des preuves que l’huile essentielle totale est plus fortement antimicrobienne que ne le laisserait supposer l’effet additif de ses composants antimicrobiens majeurs ; les composants mineurs semblent donc jouer un rôle significatif.
[ ]
Les bactéries Gram-positives ont démontré une résistance accrue à l’huile de C. erythraea, par rapport aux Gram-négatives. Envers L. monocytogenes, l’huile essentielle n’a exercé aucun effet inhibiteur, tandis que de faibles zones d’inhibition (7 et 8 mm, respectivement) ont été observées sur la croissance de B. cereus et S. aureus. Comparées à toutes les espèces testées, E. coli et S. enteritidis étaient les bactéries les plus sensibles à l’huile essentielle de C. erythraea. Parmi les bactéries Gram-négatives, les pseudomonades, en particulier P. aeruginosa et P. fluorescens, semblent être les moins sensibles à l’action des huiles essentielles.
Les résultats sont en contraste avec des rapports antérieurs indiquant que les bactéries Gram-positives sont plus sensibles aux huiles essentielles que les Gram-négatives. Cependant, ce contraste avait déjà été rapporté pour les huiles essentielles de trois espèces grecques d’Achillea, et les propriétés antimicrobiennes des constituants principaux ont montré que l’oxyde de caryophyllène était le plus efficace, suivi du camphre et du 1,8-cinéole. L’huile de C. erythraea contenait l’oxyde de caryophyllène et le camphre parmi les constituants mineurs.
Kirbağ et al. ont démontré l’activité de l’infusion de C. erythraea sur plusieurs espèces bactériennes, où Bacillus megaterium a présenté la plus grande sensibilité (13 mm) tandis qu’E. coli et S. aureus n’ont montré aucune activité antibactérienne. Cependant, la comparaison avec les présents résultats n’est pas possible, puisque des classes chimiques différentes de composés naturels ont été isolées par l’infusion de la plante (principalement des composés non volatils) et ensuite testées quant à leur activité antibactérienne.
Les parties aériennes (fleur, feuilles et tige) de C. erythraea Rafn ont été récoltées dans la région de Podravina (Croatie) près de Đurđevac et Koprivnica (spécimen de référence numéro RH-0078). Les parties aériennes de C. erythraea séchées à l’air ont été soumises à une hydrodistillation pendant 3 h, à l’aide d’un appareil de type Clevenger, pour produire une huile essentielle jaune pâle et très parfumée. L’huile obtenue a été séparée, séchée sur sulfate de sodium anhydre et conservée à 4 °C jusqu’à l’analyse. Le rendement a été calculé sur la base du poids sec de l’échantillon. Les solvants pentane et diéthyléther ont été achetés chez Kemika (HR-Zagreb) et ont été distillés avant utilisation.
L’huile essentielle (30 μL) a été fractionnée sur une colonne de gel de silice (4 g ; 30–60 mm) et deux fractions ont été obtenues. Le pentane a été utilisé pour l’élution des composés non polaires et le diéthyléther pour l’élution des composés polaires. La séparation a été suivie par chromatographie sur couche mince en utilisant des feuilles Kieselgel 60 à support aluminium (Merck). Les fractions obtenues ont été concentrées par distillation fractionnée et analysées.
Deux fibres (PDMS/DVB et DVB/CAR/PDMS), adaptées à l’extraction de composés présentant une gamme relativement large de polarités et de volatilités, ont été sélectionnées pour la HS-SPME après une recherche préliminaire. D’autres paramètres opératoires pour la HS-SPME (tels que le temps et la température d’extraction) ont également été déterminés lors d’une recherche préliminaire portant sur le nombre total de composés isolés. L’isolement des composés volatils de l’espace de tête a été réalisé à l’aide de fibres SPME manuelles avec la couche de polydiméthylsiloxane/divinylbenzène (PDMS/DVB) et de divinylbenzène/carboxène/polydiméthylsiloxane (DVB/CAR/PDMS) obtenues de Supelco Co (Bellefonte, PA, USA). Les fibres ont été conditionnées avant usage selon les instructions du fabricant. Pour l’extraction HS-SPME, 1 g de matériel végétal broyé a été placé dans un flacon en verre de 15 mL et hermétiquement scellé avec des septa PTFE/silicone. Le flacon a été maintenu dans un bain-marie à 60 °C pendant l’équilibrage (15 min) et l’extraction (45 min) et a été partiellement immergé de sorte que le matériel végétal soit sous le niveau de l’eau. Après l’échantillonnage, la fibre SPME a été rétractée dans l’aiguille, retirée du flacon, et insérée dans l’injecteur (250 °C) du GC et du GC-MS pendant 6 min, où les composés volatils extraits ont été thermiquement désorbés directement dans la colonne GC.
L’analyse par chromatographie en phase gazeuse a été réalisée sur un instrument Agilent 7890 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA) équipé d’un détecteur à ionisation de flamme et d’une colonne capillaire HP-5MS ((5 %-phényl)-méthylpolysiloxane, colonne Agilent J & W GC, 30 m × 0,25 mm × 0,25 μm) ou d’une colonne HP-FFAP (polyéthylène glycol modifié à l’acide nitrotéréphtalique, colonne Agilent J & W GC, 50 m × 0,32 mm × 0,50 μm). Les composés ont été identifiés sur un spectromètre de masse Agilent Technologies 5975C (conditions MS : tension d’ionisation 70 eV ; température de la source d’ions 280 °C ; gamme de balayage de masse : 30–300 unités de masse). Les réglages GC étaient les suivants : colonne HP-5MS (température initiale du four maintenue à 70 °C pendant 2 min puis montée à 3 °C min⁻¹ jusqu’à 200 °C), colonne HP-FFAP (température initiale du four maintenue à 70 °C pendant 2 min puis montée à 3 °C min⁻¹ jusqu’à 180 °C) et la température de l’injecteur a été maintenue à 270 °C. Les échantillons (1 μL) ont été injectés avec un rapport de division (split) de 1:50. Le gaz vecteur était l’hélium à un débit de 1,0 mL min⁻¹.
Les constituants ont été identifiés par comparaison de leurs spectres de masse avec ceux stockés dans les bibliothèques Wiley 275 (Wiley, New York, USA) et NIST 05 (Gaithersburg, MD, USA) ou avec des spectres de masse issus de la littérature, ainsi que par comparaison de leurs indices de rétention avec ceux de la littérature ou avec ceux de composés authentiques disponibles. Les indices de rétention ont été déterminés par rapport à une série homologue de n-alcanes (C₈–C₂₄) dans les mêmes conditions opératoires. Les pourcentages relatifs des composants ont été calculés sur la base des aires des pics GC sans utiliser de facteurs de correction. Les pourcentages des composants ont été calculés comme valeurs moyennes de doubles analyses GC et GC-MS.
Les bactéries suivantes (avec leurs codes internes) ont été obtenues de l’Institut national croate de santé publique (Osijek, Croatie) : Escherichia coli HZJZ32, Bacillus cereus HZJZB04, Salmonella enteritidis HZJZX41 et Listeria monocytogenes HZJZLL139 (isolées de patients atteints d’infection/intoxication). Pseudomonas fluorescens 8568 a été obtenue de la Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ) GmbH (Leidnitz, Allemagne) et Staphylococcus aureus 6538 P de l’American Type Culture Collection (Rockville, MD, USA). Les cultures bactériennes ont été maintenues sur gélose Tryptic Glucose Yeast (gélose TGYE, Biolife, Italie) à 4 °C. Les cultures de travail ont été régénérées par deux cycles de croissance successifs de 24 h sur gélose TGYE à 37 °C, sauf P. fluorescens (incubée à 25 °C). La méthode de diffusion sur disque a été utilisée pour tester l’activité antibactérienne de l’huile essentielle. À l’aide d’écouvillons stériles, une densité d’inoculum standardisée (1–2 × 10⁸ UFC/mL ; comparée au standard McFarland 0,5) a été étalée sur toute la surface de la boîte de gélose TGYE. Après séchage, trois disques antibiotiques vierges de Φ 6 mm (Liofilchem, Italie) ont été appliqués sur chaque boîte. Sur chaque disque, 5 μL d’huile essentielle (concentration finale de 1 mg/mL) ont été transférés (5 μg/disque). Après diffusion (60 minutes à 4 °C), les boîtes ont été incubées à 37 °C pendant 24 h (température de 25 °C pour P. fluorescens 8568). Après incubation, les diamètres des zones d’inhibition ont été lus à la règle. Les antibiotiques (tétracycline, ampicilline, norfloxacine et ofloxacine ; Biolife, Italie) ont été utilisés comme témoins positifs. Les quantités d’antibiotiques sur les disques étaient : ampicilline (10 μg), norfloxacine (10 μg), ofloxacine (5 μg) et tétracycline (30,55 μg).
La présente recherche a fourni un aperçu plus détaillé de la composition phytochimique de l’huile essentielle de Centaurium erythraea Rafn, et de nouvelles données sur la composition des COV de l’espace de tête ont été obtenues. La masse moléculaire, la polarité et la volatilité des COV ainsi que le type de fibre utilisé ont abouti à des compositions chimiques espace de tête/huile significativement différentes. Des différences dans la distribution des monoterpènes, sesquiterpènes et composés dérivés des acides gras entre l’espace de tête et l’huile étaient attendues, mais l’abondance des dérivés du benzène dans l’espace de tête a été une surprise, en particulier les hauts pourcentages de toluène et de naphtalène qui pourraient être liés à une origine non anthropique. Le fractionnement de l’huile a permis une analyse plus détaillée de l’huile (un certain nombre de composés n’ont été trouvés qu’après fractionnement). Beaucoup de similitudes ont été trouvées avec les rapports antérieurs sur cette huile, mais des caractéristiques différentes ont aussi été notées, indiquant une possible variabilité géographique modérée avec des composés majeurs structurellement similaires. L’huile essentielle a montré des activités antimicrobiennes sur Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Staphylococcus aureus et Bacillus cereus, mais davantage de micro-organismes devraient être testés dans des recherches ultérieures pour une évaluation détaillée de son activité antibactérienne.
Encart de synthèse
↩ Retour : Petite centaurée · Digestion · Index : _INDEX études petite centaurée (accès libre)